Как считать ретикулоциты

Содержание
  1. Ретикулоциты (клиническое значение и лабораторная диагностика)
  2. Ретикулоциты в анализе крови: расшифровка и причины отклонения
  3. Показания и проведение анализа
  4. Расшифровка теста
  5. Норма для детей и взрослых
  6. Повышенный уровень ретикулоцитов в крови: причины и лечение
  7. Низкий уровень ретикулоцитов в крови: причины и лечение
  8. Ретикулоциты при беременности
  9. Ретикулоциты
  10. Показания
  11. Подготовка к анализу и забор материала
  12. Нормальные значения
  13. Повышение уровня
  14. Снижение уровня
  15. Лечение отклонений от нормы
  16. Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями
  17. Принцип метода
  18. Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим
  19. Метод 2 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II
  20. Метод 3 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I
  21. Фотографии ретикулоцитов:
  22. Подсчет ретикулоцитов в крови
  23. Прижизненная (суправитальная) окраска ретикулоцитов
  24. Техника прижизненной окраски и подсчета ретикулоцитов
  25. Одновременная суправитальная окраска тромбоцитов и ретикулоцитов по Алексееву
  26. Техника одновременной окраски и подсчета тромбоцитов и ретикулоцитов

Ретикулоциты (клиническое значение и лабораторная диагностика)

Как считать ретикулоциты

определение числа ретикулоцитов является важным показателем функции костного мозга.

Ретикулоциты – это молодые формы эритроцитов, образовавшиеся из нормобластов после потери ими ядра (безъядерные, незрелые эритроциты), созревание которых происходит в течение 24-48 ч после выхода в периферическую кровь из костного мозга, и отражающие регенеративную способность костного мозга (т.е. эритропоэтическую активность костного мозга).

МОРФОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РЕТИКУЛОЦИТОВ

Ретикулоциты обычно крупнее, чем зрелые эритроциты. Цитоплазма ретикулоцитов содержит базофильную сеточку (ретикулум) в виде мелких зерен, отдельных нитей, клубочков и т.п., которая представляет собой агрегированные рибосомы и митохондрии.

По степени зрелости различают 5 видов ретикулоцитов:

(1) ретикулоциты, имеющие ядро (эритронормобласты), причем зернистость у них располагается в виде плотного венчика вокруг ядра;(2) ретикулоциты, имеющие зернисто-сетчатую субстанцию в виде клубка или глыбки; (3) ретикулоциты, имеющие зернистость в виде густой сети;(4) ретикулоцитов, имеющие зернисто-сетчатую субстанцию в виде отдельных нитей; (5) ретикулоциты, содержащие отдельные зернышки.

Запомните: в норме, по Г. А. Алексееву, почти 80% ретикулоцитов относится к IV – V группам.

В норме в периферической крови содержится 0,2 – 1% ретикулоцитов («%» – содержание ретикулоцитов от общего числа эритроцитов).

Данный показатель отражает возможность выхода ретикулоцитов в периферическую кровь и их дальнейшее превращение в зрелые эритроциты (созревание), как вариант нормы, уже в периферической крови (в течение нескольких часов).

(!) При нормальном эритропоэзе большинство эритроцитов проходит стадию ретикулоцитов в костном мозге.

Некоторые авторы отмечают, что у женщин количество ретикулоцитов несколько большее, чем у мужчин. У детей в первые дни жизни количество ретикулоцитов по разным данным может достигать 5 – 10%, а затем уменьшается.

Увеличение ретикулоцитов их в периферической крови (ретикулоцитоз) отмечается:

• при гемолитических анемиях (число ретикулоцитов может доходить до 60% и более (особенно сильно увеличиваясь при гемолитических кризах);• при острых кровопотерях (на 3 – 5 сутки после кровопотери возникает ретикулоцитарный криз), в том числе, увеличение ретикулоцитов позволяет заподозрить скрытое кровотечение (например, у больных язвенной болезнью желудочно-кишечного тракта, брюшным тифом);• при малярии; • при полицитемии; • при лечении железом железодефицитных анемий (через несколько дней (3 – 10) после начала антианемического лечения пернициозной анемии); • при остром недостатке кислорода;• при метастазах опухолей в костный мозг.

Следует помнить, что в случае усиленного разрушения эритроцитов доля ретикулоцитов может превышать 50% вследствие искусственного завышения числа ретикулоцитов (как уже было отмечено ранее, доля ретикулоцитов рассчитывается в % от всех эритроцитов).

В таких случаях ля оценки тяжести анемий используют «ретикулярный индекс», который рассчитывают по формуле: (% ретикулоцитов х гематокрит) / 45 х 1,85, где 45 – нормальный гематокрит, 1,85- количество суток, необходимых для поступления новых ретикулоцитов в кровь.

Если индекс < 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если > 2-3, то происходит увеличение образования эритроцитов.

Истинный ретикулоцитоз: увеличение количества ретикулоцитов в периферической крови с одновременным увеличением количества ретикулоцитов в костном мозге.

Ложный ретикулоцитоз: отсутствие повышенного количества ретикулоцитов в костном мозге при повышении их количества в периферической крови (что говорит об усилении вымывания ретикулоцитов из костного мозга в периферическую кровь).

Фактором, приводящим к увеличению значения %-ого содержания ретикулоцитов могут быть прием следующих препаратов: кортикотропин, противомалярийные лекарственные средства, жаропонижающие препараты, фуразолидона (у маленьких детей), леводопы.

Запомните: ретикулоцитоз, без соответствующей эритронормобластической реакции костного мозга, наблюдается при раздражении отдельных участков его раковыми метастазами или воспалительными очагами.

Возможной ошибкой при подсчете ретикулоцитов может быть их ложное завышение из-за наличия:

• включений в эритроцитах (тельца Жолли, малярийные паразиты); • высокого лейкоцитоза;• аномальной формы гемоглобина;• гипертромбоцитоза;• гигантских тромбоцитов.

Снижение количества или отсутствие ретикулоцитов (ретикулоцитопения) наблюдается:

• при арегенераторных апластических и гипопластических анемиях; • при анемиях, вызванных недостаточностью содержания железа, витамина B12, фолиевой кислоты (микроцитарно-гипохромные и мегалобластные анемии); • при талассемии; • при сидеробластной анемии; • при метастазах рака в кость; • при лучевой болезни и лучевой терапии; • при лечении цитостатиками;• при аутоиммунных заболеваниях системы кроветворения; • при заболеваниях почек; • при алкоголизме; • при рецидиве анемии Аддисона-Бирмера;• при микседеме.

Факторы, искажающие результат лабораторного исследования %-ого содержания ретикулоцитов:

• неправильный выбор антикоагулянта или недостаточное перемешивание крови с антикоагулянтом;• длительное сдавливание руки жгутом; • прием сульфаниламидов (возможны как заниженные, так и завышенные результаты); • переливание крови незадолго до исследования;• гемолиз пробы крови.

Показания к назначению анализа на ретикулоциты:

• оценка активности эритропоэза при состояниях, сопровождающихся гемолизом или кровопотерей;• ценка способности костного мозга к регенерации после цитотоксической терапии и трансплантации костного мозга;• ценка восстановления синтеза эритропоэтина после трансплантации почки;• допинговый контроль у спортсменов (прием эритропоэтина);• диагностика неэффективного гемопоэза или снижения продукции эритроцитов;• дифференциальная диагностика анемий;• детекция нарушения регенераторной способности костного мозга при дефиците железа, витаминов B12, B6, фолатов, меди и мониторинга соответствующей терапии;• оценка реакции на терапию эритропоэтином, эритросупрессорами.

МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА КОЛИЧЕСТВА РЕТИКУЛОЦИТОВ

(1)Подсчет количества ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями.

Данный метод является на практике наиболее используемым методом в связи с тем, что он простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, соответственно может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории. Принцип метода основан на выявлении зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками (насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте / раствор азура I /раствор азура II) с дальнейшим подсчетом их в мазке крови. Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке. Подсчет осуществляют с помощью микроскопа: приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом; в мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

(2)Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии.

Данный метод отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества, однако он возможен только при наличии люминесцентного микроскопа и специальных красителей, в связи с чем доступен лишь немногим лабораториям. Принцип подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии основан на использовании способности субстанции ретикулоцитов флюоресцировать после обработки крови акридиновым оранжевым. Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смесителе в соотношении 1 часть крови и 10 частей краски (смесь можно хранить не более 5 часов). Смесь перемешивают в течение 2 минут, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. При этом жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла. Микроскопируют с помощью светофильтра ЖС-17. В препарате эритроциты имеют темно-зеленые очертания и не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернисто-сетчатая субстанция светится ярко-красным цветом, благодаря чему ретикулоциты легко подсчитать. В крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценции ретикулоцитов не наблюдается.

(3)Автоматический подсчет количества ретикулоцитов с помощью гематологического анализатора.

В современных гематологических анализаторах технология подсчета форменных элементов крови основана на кондуктометрическом методе, предложенном H. Wallace и Joseph R. Culter в 1947 г. Принцип метода заключается в подсчете числа и определении характера импульсов, возникающих при прохождении клетки через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два изолированных друг от друга электрода. Каждое прохождение клетки через апертуру сопровождается появлением электрического импульса, который регистрируется электронным датчиком. Разделение клеток по категориям (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, осадок) осуществляется прибором на основании анализа амплитуды полученных импульсов.Чтобы определить концентрацию клеток, достаточно пропустить определенный объем пробы через канал и подсчитать количество импульсов, которые при этом генерируются. Следует обратить внимание на то, что помимо классического параметра ретикулоцитов – относительное (%) содержание ретикулоцитов (RET%, percent of reticulocytes), определяемого с помощью 1 и 2 методов лабораторной диагностики, в связи с появлением высокотехнологичных гематологических анализаторов (3 метод) стало возможным получать (например, с помощью запатентованного флюоресцентного красителя для анализатора Sysmex -XT- 2000i) дополнительные информативные ретикулоцитарные параметры:

• ретикулоциты с низким содержанием РНК, наиболее зрелые (LFR%, low fluorescence reticulocyte fractions, фракция ретикулоцитов с низкой флуоресценцией);

ретикулоциты со средним содержанием РНК

(MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) – фракция ретикулоцитов со средней флуоресценцией);

ретикулоциты с высоким содержанием РНК

(HFR%, high fluorescence reticulocyte fractions) – фракция ретикулоцитов с высокой флуоресценцией);

незрелая фракция ретикулоцитов

(IRF%, Immature Reticulocyte Fraction). Дифференцировка ретикулоцитов, основанная на степени зрелости и, соответственно, содержании нуклеиновых кислот, является отражением гемопоэтической активности костного мозга. Методика (анализатор Sysmex -XT- 2000i). В проточной кювете клетки пересекают луч полупроводникового лазера, при этом происходит рассеивание луча под большим и малым углами и возбуждение флюоресцентного красителя. Это позволяет определять различные стадии зрелости ретикулоцитов по содержанию РНК в клетках и интенсивности их свечения. Автоматизированный подсчет ретикулоцитов отличается высокой точностью (подсчитывается более 30 000 эритроцитов) и воспроизводимостью (коэффициент вариации составляет около 6%). Данная технология обеспечивает точный подсчет ретикулоцитов даже при их предельно низких концентрациях.

Источник: https://doctorspb.ru/articles.php?article_id=1816

Ретикулоциты в анализе крови: расшифровка и причины отклонения

Как считать ретикулоциты

Ретикулоциты в мазке крови

Процесс кроветворения проходит несколько этапов, каждый из которых способствует формированию зрелого эритроцита из стволовой клетки. На последнем этапе новообразовавшаяся клетка утрачивает своё ядро и становится ретикулоцитом, через 1,5 — 2 дня из него образуется эритроцит.

Ретикулоциты переносят кислород, выводят углекислый газ, но не так активно как эритроциты, так как содержат на 25% меньше гемоглобина. Показатель уровня ретикулоцитов важен при диагностике, так как отражает скорость формирования эритроцитов в костном мозге.

В кровяном русле постоянно находится практически одинаковое количество эритроцитов. Выработка новых кровяных телец в костном мозге регулируется гормоном, выделяемым почками.

Нарушение одного из этих этапов, а также ряд заболеваний и факторов, влияющих на кроветворение, сдвинут число ретикулоцитов в большую либо меньшую сторону.

Показатели анализов на ретикулоциты укажут на патологический процесс.

Показания и проведение анализа

Для определения ретикулоцитов необходима венозная кровь

Анализ на определение уровня ретикулоцитов (RET) необходим в случаях:

  1. При подозрении на внутреннее кровотечение либо после обильной потери крови.
  2. При различных онкологических заболеваниях.
  3. Диагностика и дифференциация анемии различного происхождения.
  4. Выявление эффективности лечения анемии.
  5. Мониторинг лечения гормональными препаратами.
  6. Мониторинг результативности приёма железосодержащих препаратов и витаминов.
  7. После пересадки костного мозга либо почки.
  8. При проведении допинг-контроля.

Для исследования показателей ретикулоцитов используется венозная кровь. Анализ осуществляется при помощи лазерного возбудителя, детекторов и окрашивания образца крови специфичными красителями. Ретикулоциты приобретают синеватый оттенок, излучают сигнал сильнее, чем эритроциты и несколько превосходят их по размеру, что позволяет автоматическому счётчику подсчитать точное их число.

Расшифровка теста

Определение ретикулоцитарных индексов — важный этап

Результаты анализа представлены в нескольких значениях:

  • RET# — суммарное число ретикулоцитов;
  • RET% — процентное соотношение к эритроцитам;
  • RI — ретикулоцитарный индекс;
  • IRF — фракция незрелых ретикулоцитов.

RET# вычисляется путём подсчёта всех обнаруженных ретикулоцитов в единице крови.

RET% позволяет определить число ретикулоцитов относительно их более зрелых собратьев, но оценка этого параметра, как и предыдущего, не отражает полной картины процессов кроветворения. Например, при внезапном разрушении большого числа эритроцитов количество ретикулоцитов будет относительно высоко, но это искусственное повышение.

Для точной оценки используется индекс ретикулоцитарный. Он же при различных заболеваниях позволяет спрогнозировать достаточной ли будет выработка новых кровяных телец для организма. Вычисляется индекс следующим образом:

RI = RET% * гематокрит / 45 * 1,85;

гематокрит — это общий объём красных кровяных клеток в единице крови пациента; 45 — референтное значение нормального гематокрита;

1,85 — количество суток, в течение которых в кровяное русло поступают новые ретикулоциты.

IRF позволяет определить соотношение незрелых (I — II группы зрелости) ретикулоцитов к зрелым (III — IV групп).

Норма для детей и взрослых

Каждая возрастная категория имеет свои нормы

Большая часть предшественников эритроцитов содержится в костном мозге, где продолжается процесс их формирования в более зрелые клетки. В кровь ретикулоциты попадают в небольшом количестве. При повышении уровня выделяемого почками гормона — число ретикулоцитов растёт, при понижении — падает.

Нормативные значения меняются с возрастом и зависят от полового признака.

Норма для взрослых

ПолRET# (*109/л)RET%IRF%RI
Женский17 – 640,5 – 2,053 – 15,92
Мужской23 – 700,7 – 1,92,3 – 13,42

Норма для детей RET%

ВозрастRET%
0 – 2 недели0,15 – 1,5
2 – 4 недели0,45 – 1,4
1 – 2 месяца0,45 – 2,1
2 – 6 месяцев0,25 – 0,9
6 месяцев – 2 года0,2 – 1,0
2 – 6 лет0,2 – 0,7
6 – 12 лет0,2 – 1,3
13 -18 лет девочки0,12 – 2,05
13 – 18 лет мальчики0,24 – 1,7

Повышенный уровень ретикулоцитов в крови: причины и лечение

Постлучевой период может сопровождаться ретикулоцитозом

Ретикулоцитоз — повышение уровня ретикулоцитов, провоцируют следующие факторы:

  • воспалительные процессы;
  • кровотечение;
  • гемолитическая анемия (в том числе желтуха новорожденных);
  • новообразования в костном мозге;
  • процесс выздоровления при анемии;
  • последствия лучевой терапии;
  • гемолиз;
  • курение;
  • алкоголизм.

На завышенный результат влияет приём гормональных препаратов, жаропонижающих, а также перенесённые в недавнем прошлом стрессы.

Повышенный синтез кровяных телец может носить как негативный, в случае заболеваний, так и позитивный характер. Рост ретикулоцитов достигает максимума на 4-5 день лечения анемии, означая, что болезнь поддаётся терапии.

Скачок показателей на 3 день после кровотечения — знак, что кровь активно восстанавливается.

Лечение должно быть направлено на устранение причины высокого уровня. Кровопотеря в большинстве случаев требует переливания донорской крови пациенту.

Гемолитическая анемия, сопровождающаяся ускоренным разрушением эритроцитов, предполагает тщательную диагностику органов брюшной полости, мазка костного мозга, анализов на дополнительные параметры.

При терапии могут применяться глюкокортикоидные гормоны, иммунодепрессанты, антибиотики.

Низкий уровень ретикулоцитов в крови: причины и лечение

При заболеваниях щитовидной железы ретикулоциты могут снижаться

Понижение показателей называется ретикулопения, сопровождается угнетением функций костного мозга. Пониженные значения представляют опасность из-за нехватки кислорода и последующих осложнений. Причины ретикулопении:

  • анемия апластическая (анемия Фанкони и другие);
  • анемия железодефицитная;
  • анемия фолиеводефицитная;
  • алкоголизм;
  • нарушение функций щитовидной железы;
  • уремия;
  • инфекции в хронической стадии.

Результат может быть ошибочно занижен при приёме антибиотиков, иммунодепрессантов, сульфаниламидов.
Лечение заключается в восстановлении организма и избавления от патогенных факторов. При анемии будет назначен витаминный курс либо препараты с железом. Обязательным условием будет оптимизация рациона питания и отказ от алкоголя.

Терапия хронических инфекций требует комплексного и комбинированного подхода. Могут быть прописаны иммуномодуляторы, противовирусные медикаменты. Если причина сниженных параметров кроется в щитовидной железе, необходимо будет провести УЗИ, затем возможно назначение гормональных препаратов.

Ретикулоциты при беременности

Отклонение уровня ретикулоцитов — частое явление при беременности

При беременности показатели могут отклоняться от нормы. По мере развития плода ретикулоциты становятся более или менее активными. Чаще всего у женщины диагностируется пониженный уровень кровяных клеток.

Понижение может быть как ложным, так и истинным. Ложное понижение означает, что ретикулоцитов осталось в кровяном русле столько же, но в единице крови их будет меньше.

Это происходит из-за задержки жидкости в организме и увеличения объёма крови. Истинная ретикулопения отражает показатели намного ниже нормы и может быть вызвана анемией.

Препараты с содержанием железа и витаминов группы В исправят ситуацию.

Повышение ретикулоцитов во время беременности указывает на естественный процесс ускоренного кроветворения. Таким образом организм пополняет запасы эритроцитов. Значительное возрастание показателей может свидетельствовать о развитии патологий, например, воспалительных процессов. Необходимо начать лечение незамедлительно, во избежание развития осложнений.

Нормативные показатели при беременности: 0,2 — 1,5%.

Полноценное питание, активный отдых на свежем воздухе и положительные эмоции являются основополагающими факторами для восстановления нормального уровня ретикулоцитов.

Источник: https://gidanaliz.ru/analiz/oak/retikulocity-v-analize-krovi.html

Ретикулоциты

Как считать ретикулоциты

Определение количества ретикулоцитов – клинический анализ крови, при котором осуществляется подсчет молодых эритроцитов, производимых костным мозгом. Исследование дополняет общий анализ крови.

Подсчет ретикулоцитов выполняется для дифференциальной диагностики различных типов анемий, оценки функционирования костного мозга и селезенки, мониторинга состояний пациентов с железодефицитом, дефицитом витамина В12 или фолиевой кислоты, почечной недостаточностью, онкологическими заболеваниями. Забор крови для исследования производится из вены или капилляров.

Показатель ретикулоцитов определяется при помощи метода проточной цитофлуориметрии. Референсные значения для мужчин – 23-70 тыс/мкл, для женщин – 17-63,8 тыс/мкл. Сроки выполнения анализа не превышают 1 рабочего дня.

Определение количества ретикулоцитов – клинический анализ крови, при котором осуществляется подсчет молодых эритроцитов, производимых костным мозгом. Исследование дополняет общий анализ крови.

Подсчет ретикулоцитов выполняется для дифференциальной диагностики различных типов анемий, оценки функционирования костного мозга и селезенки, мониторинга состояний пациентов с железодефицитом, дефицитом витамина В12 или фолиевой кислоты, почечной недостаточностью, онкологическими заболеваниями. Забор крови для исследования производится из вены или капилляров.

Показатель ретикулоцитов определяется при помощи метода проточной цитофлуориметрии. Референсные значения для мужчин – 23-70 тыс/мкл, для женщин – 17-63,8 тыс/мкл. Сроки выполнения анализа не превышают 1 рабочего дня.

Ретикулоциты – предшественники эритроцитов. Они производятся костным мозгом при дифференцировке и делении стволовых клеток. Большая часть ретикулоцитов находится в костном мозге, в кровоток в основном попадают уже зрелые эритроциты.

Доля ретикулоцитов в крови – около 0,5-2%. При выполнении анализа определяется количество клеток этого типа и их процент от общего числа эритроцитов.

Результаты позволяют оценить производство красных кровяных клеток в костном мозге, выявить степень активности этого процесса.

Организмом поддерживается стабильный уровень эритроцитов в крови. При снижении их количества в результате гемолиза, нарушения синтеза, кровотечения включаются компенсаторные механизмы восстановления нормальной концентрации.

По изменению уровня и процента ретикулоцитов можно установить усиление производства красных кровяных клеток в костном мозге или угнетение этого процесса. Если костный мозг функционирует нормально, то потеря эритроцитов приводит к последующему увеличению их количества и количества ретикулоцитов.

Понижение уровня этих типов клеток происходит при поражении красного костного мозга опухолью, метастазами, лучевой терапией и химиотерапией. Для проведения анализа на ретикулоциты биоматериалом является капиллярная или венозная кровь.

Исследование выполняется с помощью гематологического анализатора методом проточной цитометрии. Результаты применяются в общетерапевтической практике, в гематологии, педиатрии, инфекционистике, хирургии.

Показания

Анализ на ретикулоциты используется для оценки производства эритроцитов костным мозгом. Результаты исследования позволяют дифференцировать различные виды анемий. По уровню ретикулоцитов они подразделяются на гипорегенераторные и регенераторные.

В первом случае показатели теста снижены, производство эритроцитов недостаточное, функции костного мозга угнетены. К этой группе относятся гемолитические анемии при хронических заболеваниях, общей интоксикации, кахексии, дефиците белков, железа, витаминов.

Регенераторные анемии сопровождаются компенсаторным повышением уровня ретикулоцитов на фоне усиленного разрушения или потери эритроцитов. К этой группе относятся постгеморрагические и некоторые гемолитические анемии.

Анализ на ретикулоциты может использоваться для установления тяжести анемии, тогда его результаты дополняются показателями уровня эритроцитов, гемоглобина и эритроцитарными индексами.

Определение уровня ретикулоцитов показано при сниженном уровне эритроцитов, гемоглобина, при жалобах на частую усталость, головные боли, одышку, кровь в моче или стуле. При установленном диагнозе анемии анализ назначается с целью оценки эффективности лечения.

Особенно часто он используется для мониторинга анемий, вызванных дефицитом железа, витамина B12 или фолиевой кислоты, а также развивающихся на фоне почечной недостаточности, хронических заболеваний.

Для исследования функции костного мозга тест на ретикулоциты показан при повышенном уровне эритроцитов, для определения причины полицитемии.

Геморрой в 79% случаев убивает пациента

Анализ на ретикулоциты в крови не используется для установления диагноза. Его основное назначение в клинической практике – составление плана дальнейших диагностических процедур и контроль успешности терапии.

Количество ретикулоцитов в крови относительно стабильно, поэтому при снижении уровня эритроцитов и гематокрита показатели анализа становятся искусственно завышенными. Избежать этого помогает расчет ретикулоцитарного индекса – абсолютного числа ретикулоцитов (процент ретикулоцитов умноженный на показатель гематокрита).

Еще одной особенностью данного исследования является то, что результаты указывают на недавнюю активность костного мозга, так как незрелые эритроциты циркулируют в крови в течение 2 дней.

Подготовка к анализу и забор материала

Кровь для анализа на ретикулоциты рекомендуется сдавать с утра, натощак. Минимальный промежуток между приемом пищи и процедурой – 3-4 часа.

Не менее чем за сутки необходимо отказаться от интенсивных физических нагрузок, употребления алкоголя, избегать воздействия стрессовых факторов.

При назначении анализа стоит сообщить врачу об используемых лекарствах, так как некоторые препараты влияют на уровень ретикулоцитов в крови. За 30 минут до процедуры забора нужно отказаться от курения, исключить физическое и эмоциональное напряжение.

Уровень ретикулоцитов определяется в капиллярной или венозной крови. Соответственно забор производится из безымянного пальца или из локтевой вены. Кровь помещается в пробирку с антикоагулянтом и направляется в лабораторию.

В настоящее время для подсчета ретикулоцитов практически везде используются гематологические анализаторы. Исследование выполняется методом проточной цитометрии – клетки в потоке жидкости перемещаются через очень узкий капилляр и учитываются при облучении лазером.

Сроки исполнения анализа – 1 день.

Нормальные значения

В результатах анализа на ретикулоциты отображается абсолютное число клеток в единице объема крови и процент от общего количества эритроцитов. В норме у пациентов женского пола уровень ретикулоцитов составляет от 17*109 до 63,8*109 клеток/л, у пациентов мужского пола – от 23*109 до 70*109 клеток/л. Доля клеток этого типа в общем количестве эритроцитов изменяется с возрастом:

  • с рождения до 2 недель – от 0,15 до 1,5%;
  • с 2 недель до 1 месяца – от 0,45 до 1,4%;
  • с 2 до 6 месяцев – от 0,25 до 0,9%;
  • с 6 месяцев до 2 лет – от 0,2 до 1%;
  • с 2 до 6 лет – от 0,2 до 0,7%;
  • с 6 до 12 лет – от 0,2 до 1,3%;
  • с 12 до 18 лет – от 0,12 до 2,05% для девушек, от 0,24 до 1,7% для юношей;
  • с 18 лет – от 0,59 до 2,07% для женщин, от 0,67 до 1,92% для мужчин.

Физиологическое повышение уровня ретикулоцитов в крови происходит при кислородном голодании, вызванном подъемом на большую высоту или спуском под воду, длительным пребыванием в непроветриваемом помещении, курением, приемом алкоголя. Кроме этого, увеличение концентрации данных клеток иногда определяется у беременных и рассматривается как вариант нормы.

Повышение уровня

Причиной повышения уровня ретикулоцитов в крови может быть кровотечение. Концентрация эритроцитов снижается, чтобы ее восстановить, костный мозг увеличивает продукцию их предшественников.

При остром кровотечении количество ретикулоцитов возрастает на 3 или 4 день, при хроническом – остается стойко повышенным все время. При заболеваниях сопровождающихся гемолизом (разрушением эритроцитов) показатель ретикулоцитов значительно превышает норму, иногда отклонения достигают 300%.

Наиболее распространенные патологии этой группы – наследственные дефекты эритроцитов, их аутоиммунное разрушение, токсическое поражение при малярии.

Другими причинами повышения уровня ретикулоцитов могут быть полицитемии, воспалительные процессы, рак костного мозга или распространение метастазов в него, восстановление функций костного мозга после лучевой и химиотерапии. При лечении анемий нормализация концентрации ретикулоцитов свидетельствует об успешности терапевтических мероприятий.

Снижение уровня

Причиной снижения уровня ретикулоцитов в крови могут быть анемии, вызванные дефицитом железа, витамина B12 или фолиевой кислоты. В таких случаях производство клеток крови сокращается из-за недостатка «строительного материала».

Другой причиной снижения уровня ретикулоцитов являются анемии, развивающиеся на фоне поражений костного мозга или угнетения его функций.

Изменения такого типа определяются при алкогольной интоксикации, снижении активности щитовидной железы, хронических инфекциях, аутоиммунных патологиях, заболеваниях почек, воздействии токсических веществ, в том числе лекарственных препаратов, облучении.

Лечение отклонений от нормы

В клинической практике тест на ретикулоциты чаще всего назначается после общего анализа крови при снижении показателей эритроцитов и гемоглобина. Уровень ретикулоцитов позволяет оценить функции костного мозга, синтез эритроцитов, определить тип анемии, отслеживать эффективность ее лечения.

Если результаты исследования отклоняются от нормальных, стоит обратиться за консультацией к лечащему врачу – терапевту, педиатру, гематологу, хирургу.

Чтобы предупредить влияние физиологических факторов на количество ретикулоцитов, необходимо исключить ситуации, вызывающие кислородное голодание – подъемы на высоту или спуски под воду, длительное пребывание в загазованном или душном помещении, курение, употребление алкоголя.

Источник

Источник: https://illnessnews.ru/retikylocity/

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями

Как считать ретикулоциты

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

см. также статьи Ретикулоциты и Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Можно использовать один из следующих красителей:

  1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.
  2. Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% – 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
  3. Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Микроскоп.

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

https://www.youtube.com/watch?v=51n7O7Jpce8

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски.

В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин.

Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Окраска ретикулоцитов
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Reticulocytes

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения.

Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

  • Справочник “Лабораторные методы исследования в клинике” под редакцией Меньшикова В. В. – Москва, “Медицина”, 1987 г
  • Любина А. Я., Ильичева Л. П. и соавторы – “Клинические лабораторные исследования” – Москва, “Медицина”, 1984 г.

Метод подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества.

Раздел: Гемоцитология

Читать

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции (ретикулума), представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии.

Раздел: Гемоцитология

Читать

Тельца Жолли (тельца Хауэлла-Жолли) – мелкие круглые фиолетово-красные включения размером 1 – 2 мкм, встречаются по 1 (реже по 2 – 3) в одном эритроците. Предсталяют собой остаток ядра после удаления его РЭС. Выявляются при интенсивном гемолизе и “прегрузке” РЭС, после спленэктомии, при мегалобластной анемии..

Раздел: Гемоцитология

Читать

Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).

Раздел: Цитохимия

Читать

Метод Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче.

Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи.

По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Раздел: Анализ мочи

Читать

Источник: http://www.clinlab.info/Hemocytology/Reticulocytes-counting-49

Подсчет ретикулоцитов в крови

Как считать ретикулоциты

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Предметные стекла.
  2. Шлифованные предметные стекла.
  3. Влажная камера.
  4. Смесители для белых и красных кровяных телец.
  5. Стекла с луночкой.
  6. Микроскоп.
  7. Бриллианткрезиловая синька.
  8. Абсолютный этиловый спирт.
  9. Метиловый спирт или смесь Никифорова (равные части этилового 96° спирта и эфира).
  10. Реактив Гайема или 3% раствор поваренной соли.
  11. Иммерсионное масло.
  12. Набор инструментов для укола в палец.

В зависимости от строения зернисто-сетчатой субстанции различают пять видов ретикулоцитов: пылевидный, венчикообразный, неполносетчатый, полносетчатый и клубкообразный (см. рис).

Различные группы ретикулоцитов по степени зрелости

Взятие крови с целью подсчета в ней ретикулоцитов производят по указанию врача. Чтобы подсчитать количество ретикулоцитов, их окрашивают. С этой целью используют:

  1. Способ прижизненной (суправитальной) окраски ретикулоцитов.
  2. Способ одновременной суправитальной окраски тромбоцитов и ретикулоцитов по Алексееву.

Рассмотрим данные способы более подробно.

Прижизненная (суправитальная) окраска ретикулоцитов

Для этого способа необходимы следующие реактивы:

  1. Абсолютный этиловый спирт: в сухую с притертой пробкой посуду помещают прокаленную безводную (белого цвета) сернокислую медь и приливают 1/4 часть абсолютного спирта. Содержимое взбалтывают. Абсолютный спирт (спирт, не содержащий воды) можно получить обезвоживая спирт сернокислой медью, предварительно прокаленной. Обезвоживание прекращают тогда, когда сернокислая медь перестает голубеть.
  2. Насыщенный раствор бриллианткрезиловой синьки в абсолютном спирте: к 80 мл абсолютного спирта прибавляют 1 г бриллианткрезиловой синьки.
  3. Азур I.

Техника прижизненной окраски и подсчета ретикулоцитов

Предметные стекла заранее покрывают насыщенным раствором бриллианткрезиловой синьки. Свежевыступившую каплю крови распределяют по предметному стеклу с краской, как при приготовлении мазка крови.

Препарат немедленно помещают на 6-8 минут во влажную камеру, после чего высушивают на воздухе и микроскопируют (окуляр 7Х, объектив 90X с поднятым конденсором). Ретикулоциты подсчитывают точно так же, как тромбоциты, с ограничителем поля зрения.

Ретикулоциты, окрашенные бриллианткрезиловой синькой, бледно-зеленые с сеточкой голубого или синего цвета (см. рис.).

Ретикулоциты, окрашенные бриллианткрезиловой синькой

Вместо бриллианткрезиловой синьки для окраски ре тикулоцитов можно использовать, согласно прописи Магиной, краску азур I (1 г азура I на 40 мл абсолютного спирта; выдерживают при комнатной температуре 2 дня).

Одновременная суправитальная окраска тромбоцитов и ретикулоцитов по Алексееву

Для этого способа применяют краску Алексеева.

В колбу емкостью 100 мл насыпают 1 г краски азур II и добавляют приготовленный в отдельной колбе реактив следующего состава: 5 г лимоннокислого натрия, 4 г хлористого натрия и 45 мл дистиллированной воды.

Содержимое колбы медленно нагревают на асбестовой сетке при постоянном помешивании, не доводя до кипения. Охлаждают, фильтруют. Фильтрат используют в качестве рабочего раствора краски.

Техника одновременной окраски и подсчета тромбоцитов и ретикулоцитов

В смеситель для лейкоцитов до метки 1,0 набирают краску Алексеева, вытирают кончик от краски и кладут на стол. Производят более глубокий, чем обычно, укол в палец. Кровь набирают до 4/5 объема расширенной части смесителя, следя за тем, чтобы в нее не попадали пузырьки воздуха.

Кровь быстро выдувают из капиллярной части смесителя на ватку, а остальное содержимое — в луночку предметного стекла. С луночки жидкость вновь набирают в смеситель. Двух-, троекратным повторением этой манипуляции смешивают кровь с реактивом.

Набрав последний раз жидкость в смеситель, его оставляют в горизонтальном положении на 15-30 минут для окрашивания ретикулоцитов и тромбоцитов. Затем смеситель встряхивают в течение минуты и выпускают 1-2 капли. Из последующих капель готовят тонкие мазки.

Препараты высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом и докрашивают краской Романовского в разведении 1-2 капли на 1 мл воды в течение 35-45 минут. Краску смывают водой, а мазки высушивают и микроскопируют. В мазке, окрашенном по Алексееву, ретикулоциты розовые с сеточкой синего цвета (см. рис.), а тромбоциты голубовато-сиреневого цвета.

Ретикулоциты, окрашенные по Алексееву

Подсчет ретикулоцитов и тромбоцитов производят одновременно на 1000 эритроцитов так же, как описано в теме «Тромбоциты». Результаты для ретикулоцитов выражают в promille; тромбоциты рассчитывают на 1 мм3 крови (для расчета учитывают количество эритроцитов, подсчитанных у данного больного).

В крови здоровых лиц насчитывают 5-10 % ретикулоцитов.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/blood/podschet_retikulocitov_v_krovi/39-1-0-760

Ваш лекарь
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: