Изготовление гистологических препаратов

Приготовление гистологических срезов

Изготовление гистологических препаратов

Изучение патологических процессов на клеточном и тканевом уровне производится при помощи микроскопических исследований. Гистологический метод исследования необходим для изучения строения и функции клеток в состоянии нормы, патологии и экспериментальном периоде. Для гистологического исследования берутся элементы тканей и органов. Толщина исследуемого образца не может превышать 1 см3.

Образцы тканей могут браться у человека сразу после смерти (чем быстрее, тем лучше) – аутопсия. Также материал может браться во время операции или непосредственно в диагностических целях при помощи специальных инструментов – биопсия.

Приготовление образцов

Приготовление образцов происходит в несколько этапов:

  • Фиксация материала.
  • Приготовление среза.
  • Процесс окрашивания среза.

Суть фиксации материала заключается в остановке естественных процессов в тканях и клетках. Это необходимо для того, чтобы во время купировать процесс гниения и ферментативные изменения в структуре тканей.

В фиксируемых тканях за счет физико-химических процессов происходит свертывание (коагуляция) белков и липоидной составляющей. Это состояние позволяет тканям долго храниться в неизменном виде, без реакции на различные воздействия. Проще говоря, фиксация тканей проводится с целью сохранения прижизненной структуры биологического материала.

Для фиксации тканей применяются специальные жидкости (фиксаторы). Наиболее популярными фиксаторами можно назвать следующие варианты жидкостей:

  • Формальдегид.
  • Спирт (96, 100%).
  • Осмиевая кислота.

Выше перечислены простые фиксаторы. Также для фиксации тканей применяются более сложные варианты фиксаторов (растворы):

  • Спирт-формол.
  • Жидкость Ценкера.
  • Двухромовоокислый калий.

В списках указаны лишь некоторые виды применяемых фиксаторов. Продолжительность необходимого для фиксации образцов тканей периода может варьироваться от нескольких часов до суток.

Длительность зависит от особенностей исследуемых образцов и типа выбранного фиксатора. После того как этап фиксации пройден необходимо произвести промывку материала (в течение нескольких часов) в проточной воде.

Это делается для того чтобы освободить образцы от излишков фиксирующей жидкости и осадочной взвеси.

Мутные непрозрачные образцы не подходят для исследования. Такие кусочки материала не позволят получить необходимую информацию.

Перед тем как приступить к одному из главных этапов – осуществлению среза, образцы промываются чистой водой в течение нескольких часов. Далее, материал подвергается процессу обезвоживания.

Обезвоживание осуществляется при помощи проведения тканевого образца через спирты возрастающей крепости. Этот этап длительный. В каждом спирте кусочки материала находятся от 2-3 часов до суток.

После обезвоживания проводится заливка образцов. Этот этап необходим для уплотнения тканей и получения качественных блоков для исследования. Уплотнение проводится путем замораживания (срочная биопсия) или путем заливки парафином или целлоидином.

Заливка парафином – достаточно длительная процедура (от 24 часов и дольше). Такой вариант уплотнения образцов используется для осуществления исследования в обычном режиме. Для лучшей визуализации отдельных структур тканей срезы окрашивают.

Для окрашивания применяют специальные гистологические красители (кислые, основные, специальные).

Подготовленные к изучению образцы исследуют при помощи специального микроскопа.

Прежде чем приступить к изучению гистологического препарата необходимо убедиться, что последний полностью соответствует ряду обязательных требований:

  • В материале должны быть сохранены прижизненные структуры.
  • Срез должен быть тонким и прозрачным.
  • Структуры, которые требуется подвергнуть изучению должны быть четко визуализированы за счет окрашивания.
  • Препараты должны иметь длительный срок хранения.

При качественном приготовлении препарата достичь соответствия всем перечисленным требованиям достаточно просто. Однако нельзя исключить возможность возникновения небольших погрешностей. Если вовремя распознать некоторые виды неточностей, купировать брак, создать качественный материал вполне возможно.

Самыми распространенными погрешностями при приготовлении срезов можно назвать следующие варианты:

  • Крошение среза.
  • Выпадение материала из парафиновой массы.
  • Невозможность нарезки материала.
  • Разрыв материала.

Те или иные погрешности могут возникать по разным причинам. Иногда в основе нарушения качества образца лежат ошибки во время изготовления. Для устранения каждой погрешности предусмотрены определенные алгоритмы действий.

Методы гистологического исследования

Для осуществления микроскопического исследования необходимы тонкие кусочки материала. Ширина таких кусочков измеряется в микрометрах. Для удобства получения таких срезов используются специальные приборы – микротомы. Конструкция этого прибора предусматривает возможность получения срезов толщиной 5-10 микрометров.

Основным методом исследования в гистологии является микроскопия. При помощи микротома можно изготавливать тончайшие срезы, подходящие для проведения микроскопических исследований. Получение среза происходит за счет движения ножа в одном направлении. Толщина среза задается на этапе срабатывания механизма подъема.

Для изготовления срезов из материала, залитого парафином или целлоидином, используют радиальный, ротационный или санный микротом.

Для получения среза с растительных или животных тканей могут применяться специальные замораживающие микротомы. Для микроскопического исследования используется несколько методов приготовления срезов. Для каждого из методов выбираются определенные виды микротомов и применяются определенные четкие алгоритмы действий.

Гистологические срезы бывают:

  • Ступенчатые.
  • Серийные.
  • Горизонтальные.

Могут производиться срезы фиксированного и нефиксированного материала. Все зависит от характера исследуемых тканей и основных целей проведения означенного исследования. Также в гистологии существуют другие методы приготовления срезов.

Микротомы и их применение

Как уже было сказано выше, срезы в гистологии создаются при помощи специального устройства – микротома. В самом названии заложена расшифровка предназначения прибора – micros (маленький), tome (рассечение). Одним из самых используемых можно назвать санный микротом.

Название прибора произошло от принципа работы механизма, который базируется на подаче ножа с зажимом при помощи специальных салазок. Санный микротом предназначен для осуществления парафиновых срезов.

Как правило, такой прибор работает с одноразовыми лезвиями или кассетами. Такой высокоточный микротом состоит из станины, механизма микроподачи, подъемного механизма, зажимов для блоков, ножедержателя.

Такой аппарат позволяет изготавливать срезы толщиной от 0,5 до 60 микрометров. Санный микротом отличается высокоточной регулировкой толщины среза. Функция подачи материала может быть механической или ручной. Данный прибор предназначен для осуществления рутинных исследований в области медицины, ботаники и биологии.

Ротационный микротом – прибор с неподвижным ножом и подвижным столиком. В приборе предусмотрена моторизованная подача образца. Этот микротом предназначен для использования в гистологической лаборатории для проведения исследований, направленных на решение гистологических и гистопатологических задач.

Для получения срезов с нефиксированных тканей или в тех случаях, когда необходимо срочное проведение исследования используются замораживающие микротомы. Такие приборы снабжены замораживающим столиком, на котором и закрепляется исследуемый образец.

Главным правилом успешного получения гистологического среза при помощи микротома является правильный выбор угла наклона ножа и угла сечения. Наилучшим углом наклона является тот, при котором плоскость лезвия находится параллельно верхней части блока.

Если выбрать угол наклона больший, чем требуется, образуется риск, что срез будет крошиться. При меньшем угле наклона лезвие будет скользить по поверхности материала.

Получение требуемого результата при таком положении ножа невозможно. Величина угла сечения зависит от характера исследуемого материала. Чем образец мягче, тем меньше будет угол резания.

При обработке мягких блоков неплохим вариантом считается косое расположение ножа.

Резание на микротоме

Для приготовления срезов с парафинированных объектов или образцов, обработанных целлоидином, опять же чаще всего используют ротационный микротом.

Сначала блок подвергают обрезке. Это необходимо для устранения свободного парафина или другого уплотнителя. Если эту процедуру не произвести, срез может получиться неравномерным, морщинистым и, как следствие, малоинформативным. Также сморщивания можно избежать при помощи охлаждения исследуемого материала.

Далее, парафиновый блок прочно закрепляется в зажиме. Предварительно необходимо выверить правильный угол расположения ножа и выбрать необходимый угол резания. После этого нужно используя регулировку механизма подачи, установить блок так, чтобы его поверхность находилась от лезвия ножа на расстоянии 0,5-1 мм.

После осуществления подгонки проводится установка микрометрической шкалы для получения первых толстых срезов. После этого производится моделирование блока (срезка излишков парафина, предание прямоугольной формы). Заключительным этапом является выставление микрометрической шкалы на задуманную толщину и осуществление окончательной резки материала.

Источник: http://www.rumex.ru/information/prigotovlenie_gistologicheskih_srezov-332

Техника изготовления гистологических препаратов -ЧИТАЛЬНЫЙ ЗАЛ

Изготовление гистологических препаратов

Изготовление гистологических препаратов включает: 1) фиксацию материала; 2) приготовление гистологических срезов; 3) окрашивание срезов.

Фиксация материала

Общие сведения. Сущность фиксации заключается в том, чтобы сохранить взятые кусочки органов и тканей от гниения и ферментативных процессов, изменяющих структуру тканей.

Фиксируемые ткани претерпевают ряд физико-химических изменений. Наиболее существенными из них являются: быстрое свертывание белков и отчасти липоидов и переход их в такое состояние, при котором ткани не изменяются от длительного хранения и во время последующих обработок.

Фиксацию тканей производят в жидкостях различного состава. Наиболее употребляемыми являются формалин, спирт, реже ацетон, сулема и др.

Фиксация формалином. Продажный формалин (40%-ный водный раствор формальдегида) применяется в 10%-ном, 15%-ном растворе (10,0—15,0 продажного формалина на 90,0—85,0 воды). Формалин в указанной концентрации сравнительно быстро (48— 72 ч) пропитывает ткань и хорошо фиксирует ее.

Нельзя фиксировать материал в растворе формалина более высокой концентрации или в неразведенном продажном формалине.

В этом случае поверхностные слои ткани быстро уплотняются, образуют корочку, которая препятствует проникновению фиксирующей жидкости вглубь, где процессы аутолиза могут продолжаться.

В связи с тем, что в формалине всегда содержится какое-то количество муравьиной кислоты, которая может оказать отрицательное воздействие на ткань и помешать некоторым методам дальнейшей обработки материала (серебрение и др.) его следует нейтрализовать мелом. На 100 г продажного формалина (40%-ный раствор формальдегида) прибавляют Юг мела.

Содержимое несколько раз взбалтывают, затем дают отстояться, пока мел осядет на дно посуды. Следует также иметь в виду, что при хранении формалина в холодном помещении формальдегид способен к .полимеризации и выпадению из крепких растворов в виде белых осадков.

В целях предупреждения этого рекомендуют хранить формалин в теплом помещении, в темной посуде.

Кусочки ткани, взятые для гистологического исследования, не должны быть толще 0,5—0,7 см. Чтобы кусочки ткани не прилегали плотно к стенкам банки, их кладут на вату или фильтровальную бумагу.

Объем фиксирующей жидкости должен превышать примерно в 10 раз объем взятого материала.

Фиксация водным раствором формалина нежелательна в тех случаях, когда исследование ткани имеет целью обнаружение веществ, растворимых в воде.

В случаях, когда требуется быстрое исследование, кусочки ткани фиксируют в формалине, нагретом до 85—90° С. Продолжительность фиксации кусочков толщиной 2—3 мм при такой температуре 10—15мин.

При длительном хранении материала; в формалине в фиксируемой ткани образуются темно-бурые осадки, которые загрязняют препараты.

Для удаления осадков рекомендуется опускать гистологические срезы в 2—3%-ный раствор перекиси водорода или в 1%-ный раствор едкого кали, затем их несколько раз промывать водой.

Фиксация спиртом. Этот метод целесообразен только в тех случаях, кргда необходимо зафиксировать в тканях вещества, растворимые в воде и водных растворах фиксаторов. Для фиксации применяют спирт 95 или 100°.

Спирт, извлекая воду из кусочков ткани, сам разбавляется и делается менее крепким. Поэтому рекомендуется менять спирт несколько раз. Кусочки ткани при фиксации спиртом должны быть толщиной 2—3 мм.

В зимнее время рекомендуется применять спирт-формалин (спирта 70°—90,0, формалина 10,0).

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ СРЕЗОВ

Общие сведения. Для изготовления гистологических срезов фиксированная ткань нуждается в дополнительном уплотнении. Для этого существует несколько методов: замораживание ткани, пропитывание ее целлоидином, парафином и т. п.

После фиксации и уплотнения ткани тем или иным способом приготовляют срезы. Для получения тонких

Срезов одинаковой толщины, годных для макроскопического исследования, пользуются особыми аппаратами микротомами. Их существует несколько типов. Наиболее употребительными являются замораживающие и санные микротомы (рис. 137). Принцип устройства их состоит в том, что после каждого среза столик, к которому прикреплена исследуемая ткань, поднимается на заданную высоту.

Таким образом, срезы получаются одинаковой толщины. Срез должен быть достаточно тонким и прозрачным, обычно изготовляют срезы толщиной от 4 до 15 м>км. Замораживание ткани.

При изготовлении гистологических препаратов ткань замораживают на замораживающем микротоме, применяя жидкую углекислоту, эфир, хлорэтилен, или с помощью электрического тока на столике из полупроводников.

Путем замораживания ткани удается довольно быстро изготовить гистологические препараты. Этот метод используется также при исследовании тканей на отложение в них жира и жиросодержащих веществ, поскольку жиры растворяются в спиртах, ксилоле и ацетоне.

Заливка ткани в целлоидин. Для заливки препаратов в целлоидин вырезают кусочки ткани толщиной 1—3 мм и последовательно проводят через спирты возрастающей крепости — 50, 75, 95 и 100°, выдерживая по 24 ч в каждом.

Через спирт крепостью 100° кусочки ткани рекомендуется проводить дважды, выдерживая по 24 ч каждый раз. Затем кусочки ткани переносят в смесь равных частей абсолютного (100°) спирта и эфира также на 24 ч.

После этого кусочки ткани помещают вначале в 2%-ный, а потом 8%-ный раствор целлоидина на 2—3 дня в каждый.

Целлоидин готовят из кино — или фотопленки. Вначале ее отмывают от желатины в горячей воде, затем просушивают, мелко нарезают и растворяют в смеси из равных частей спирта и эфира. 2%-ный раствор целлоидина по консистенции сходен с жидким коллодием, а 8%-ный напоминает густой сироп.

После выдержки в густом целлоидине кусочки ткани заливают этим же целлоидином в чашечке под колпаком, где он уплотняется в течение 12—24 ч. Когда целлоидин приобретет плотность эластичной резины, вырезают блоки и наклеивают их целлоидином на квадратные деревянные кубики. Можно заливать кусочки ткани целлоидином непосредственно на кубиках.

Влоки необходимо маркировать, для чего на одной из боковых поверхностей кубика делают тушью соответствующее обозначение. Обычно пишут номер исследования.

Хранят кусочки, залитые в целлоидин, в 70° спирте. Заливка ткани в парафин. Обезвоживание ткани производят в спиртах восходящей крепости в том же порядке, как и при; целлоидиновой проводке.

После выдержки кусочков исследуемой ткани в 100° спирте их переносят в смесь равных частей абсолютного спирта и ксилола на 2—3 ч. Затем кусочки ткани заливают чистым ксилолом и выдерживают в течение 2 — 3 ч.

По истечении указанного срока их переносят в новый чистый ксилол на 2—3 ч, потом в парафин-ксилол (насыщенный раствор парафина в ксилоле при 30° С) на 1 —1,5 ч. После этого кусочки ткани помещают в чистый; парафин при температуре 54— 56° С на 1,5—2 ч.

Затем их заливают парафином в бумажные или металлические формочки и охлаждают в воде. Уплотненные кусочки ткани, так же как и целлоидиновые блоки, наклеивают на деревянные кубики и маркируют.

ОКРАШИВАНИЕ СРЕЗОВ

Общие сведения. Окраска гистологических срезов основана на неодинаковом сродстве тканевых элементов к определенным красителям. Ядра клеток более способны окрашиваться основными, а цитоплазма — кислыми красками. Соответственно этому различают основные, или ядерные, и кислые, или диффузные, краски.

Наиболее часто в обычной ветеринарной патологоанатомической практике применяются окраски срезов гематоксилин-эозином по Ван-Гизону, Перлсу, Суданом III и др.

Окраска гематоксилин-эозином. Окрашивают срезы в маленьких чашках Петри или на стеклах. Этот метод применяется для окраски срезов, приготовленных любым способом.

При этом ядра клеток приобретают фиолетово-синий или густо-синий цвет, а цитоплазма и волокнистое вещество — светло-синий или розово-красный. Жиры и липоиды не окрашиваются.

Эритроциты млекопитающих, поскольку они ядер не содержат, окрашиваются только эозином.

Окраску срезов в чашках Петри производят следующим образом.

1. Срез переносят препаровальной иглой из воды в раствор гематоксилина на 2—5 мин.

2. Промывают в воде 2—5 мин.

3. Погружают на 10—20 с в 1%-ный раствор соляной кислоты на 70° спирте (если срез сильно перекрашен гематоксилином, его следует держать в этом растворе несколько дольше).

4. Промывают в чистой воде 5—10 мин.

5. Промывают в слабощелочном растворе (в баночку с водой прибавляют 1—2 капли нашатырного спирта) 10 мин.

6. Промывают снова чистой водой в течение 10— 15 мин. Если срез после щелочной воды недостаточно промыт, он плохо опрашивается эозином.

7. Окрашивают эозином в течение 3—5 мин.

8. Промывают в течение 1—2 мин водой. 280

9. Обезвоживают в спиртах восходящей крепости— 75, 90, 100°. Если срез перекрашен эозином, его следует несколько дольше держать в 75° спирте.

10. Просветляют в карболксилоле.

11. При помощи шпателя и иголки срез переносят на предметное стекло.

12. Высушивают фильтровальной бумагой.

13. На срез наносят каплю канадского или пихтового бальзама и накрывают покровным стеклом.

Окраска по Ван-Гизону. В срезах, окрашенных по Ван-Гизону, соединительная ткань красится в ярко-красный, остальные ткани — в желтый или серовато-желтый цвет. Ядра окрашиваются в черный или тёмно-фиолетовый цвет.

Окраску производят следующим образом.

1. Срезы интенсивно окрашивают гематоксилином (лучше гематоксилин Вейгерта) и споласкивают в воде.

2. Сразу переносят в пикрофуксин на 3—5 мин (смесь насыщенного водного раствора пикриновой кислоты—150,0 и насыщенного водного раствора кислого фуксина — 3,0—5,0).

3. Быстро промывают в воде (вода извлекает из среза фуксин).

4. Обезвоживают 95° спиртом 1—2 мин.

5. Просветляют в карболксилоле и заключают в пихтовый бальзам, как при окраске гематоксилин-эозином.

Окраска Суданом III. Судан III — нейтральная азокраска, растворимая в спирте, ацетоне и жирах, не растворимая в воде. Окраску Суданом III производят для определения в срезах жиров и липидов. Техника окраски следующая.

1. Замороженные срезы переносят изводы на 0,5— 1 мин в 50° спирт.

2. Срезы помещают в свежефильтрованный раствор Судана на 10—20 мин.

3. Споласкивают 50° спиртом в течение 0,5—1 мин.

4. Тщательно промывают водой в течение 10 — 15 мин.

5. Срезы подкрашивают квасцовым гематоксилином Эрлиха или Бемера.

6. Промывают водой в течение 3—5 мин. Перекрашенные в гематоксилине срезы дифференцируют

В 1%-ном водном растворе соляной кислоты, споласкивают подщелоченной водой, затем чистой водой.

7. Заключают в глицерин или глицерин-желатину.

8. Накрывают покровным стеклом. Окраска по Перлсу. Этот способ окраски применяют для выявления в тканях гемосидерина.

1. Из дистиллированной воды срезы переносят стеклянными иглами на 15—20 мин в свежеприготовленную смесь, состоящую из одной части 2%-ного раствора желтой кровяной соли и полутора частей 1%-ного водного раствора соляной кислоты.

2. Промывают дистиллированной водой в течение 5—10 мин.

3. Докрашивают квасцовым кармином 15—20 мин.

4. Ополаскивают в воде и проводят через спирты, карболксилол и бальзам.

Железосодержащий пигмент — гемосидерин — приобретает синевато-зеленоватый или голубоватый цвет.

Окраска по Туревичу. По способу Туревича окрашивают срезы, изготовленные из мозга, для диагностики бешенства. При этом тельца Бабеша — Негри и эритроциты окрашиваются фуксином в красный цвет, нервные клетки гематоксилином — в синий.

Для гистологического исследования берут кусочки аммонова рога и мозжечка, фиксируют их в 10%-ном формалине, ацетоне или жидкости Адуцкевича следующего состава: 80%-ной уксусной кислоты — 1 часть, хлороформа —2 части, 96° этилового спирта — б частей.

Продолжительность фиксации при комнатной температуре в формалине 1 сут, в ацетоне и жидкости Адуцкевича — 3—6 ч. После фиксации вырезают кусочки толщиной не более 1 —1,5 мм, заливают в парафин, после чего готовят гистологические срезы, высушивают и окрашивают.

Окраску по Туревичу производят следующим образом.

1. Срезы перед окраской депарафинируют в ксилоле 10—20 мин.

2. Смывают спиртом.

3. Окрашивают ядра клеток гематоксилином Вей-герта в течение 2 мин.

4. Срезы промывают водой.

5. Дополнительно окрашивают 1 % — ным раствором

Кислого фуксина в течение 1 мин.

6. Промывают водой.

7. Дифференцируют в смеси 95° спирта и насыщенного водного раствора пикриновой кислоты в течение 10—20 с до ясно-желтого оттенка.

8. Высушивают фильтровальной бумагой.

9. Обезвоживают абсолютным спиртом.

10. Просветляют в ксилоле в течение 1 мин.

11. Заключают в канадский, или пихтовый, бальзам.

Рис. 137. Общий вид замораживающего микротома:/ — шланг для подачи углекислоты;2—- столик; 3 — нож.

Источник: http://chitalky.ru/?p=4958

Основы гистологии – Техника изготовления гистологических препаратов

Изготовление гистологических препаратов

Подробности Категория: Архивы

Хороший гистологический препарат должен отвечать следующим основным требованиям: 1) исследуемая ткань должна в максимальной степени сохранять свое прижизненное строение; 2) срез должен быть достаточно тонким и прозрачным (для того чтобы через него свободно проникали лучи проходящего света); 3) изучаемые микроструктуры должны отчетливо выделяться на общем фоне препарата. Именно на обеспечение этих требований и направлены все усилия в процессе приготовления микроскопического препарата.

Первое из условий обеспечивается своевременным взятием и надлежащей фиксацией исследуемого материала, второе   —  качественным приготовлением и обработкой срезов, третье   —  соответствующей окраской изучаемых микроструктур.

Взятие материала для изготовления гистологических препаратов

Сбор материала является первым этапом в приготовлении гистологических препаратов, и от того, насколько правильно выполнена эта процедура, зависит успех всей работы.

Существует несколько путей получения материала: 1) от животных, умерщвленных специально для этих целей; 2) от животных и людей в результате прижизненного оперативного иссечения кусочков тканей из органов живого организма (биопсия); 3) взятие материала от трупа.

Там, где возможно, следует предпочесть первые два способа, так как они позволяют приготовить препараты, наиболее полно отражающие прижизненное состояние микроструктур.

Качество трупного материала находится в прямой зависимости от времени, прошедшего с момента смерти организма, так как в органах и тканях очень скоро начинают развиваться посмертные изменения.

Об этом следует постоянно помнить и по возможности стремиться к максимальному сокращению сроков взятия материала. В нашей стране вскрытие трупов людей разрешено не ранее чем через 12 ч после констатации смерти врачом.

Лишь в отдельных случаях допускается более раннее вскрытие в присутствии комиссии, состоящей не менее чем из трех врачей (Приказ Министерства здравоохранения СССР № 667 от 15.10.70 г.).

Умерщвление экспериментальных животных

В лабораторной практике применяют ряд методов умерщвления экспериментальных животных: отсечение головы (декапитация), умерщвление при помощи наркоза, пропускание электрического тока через тело животного, введение в кровеносное русло воздуха (уколом в сердце или внутривенно) или в плевральную полость эфира (хлороформа). Выбор метода диктуется видом животного и целями исследования, но наибольшее распространение в лабораторной практике получили первые два способа умерщвления. Отсечение головы (декапитация) является основным способом умерщвления мелких лабораторных животных (лягушки, мыши, крысы) и осуществляется с помощью ножниц.

Для декапитации более крупных лабораторных животных (морские свинки, кролики, кошки, собаки) применяют специальные станки, в головной части которых имеется устройство с фиксацией головы и падающим на шею тяжелым ножом (гильотина).

Вскрытие лабораторных животных

После умерщвления тело животного быстро фиксируют в положении на спине. Лягушек, тритонов, мышей и других мелких лабораторных животных фиксируют на дощечках, восковых или пробковых пластинках (рис.

56), прикалывая за растянутые в стороны лапки.

Для фиксации средних и крупных лабораторных животных используют специальные станки или же изготовленные для этих целей доски (оцинкованные или окрашенные с вбитыми по краям крючками или гвоздиками для привязывания конечностей).
Рис. 56.

Вскрытие лабораторного животного.

Техника вскрытия брюшной и грудной полостей для всех лабораторных животных одинакова. Однако у животных, имеющих шерстный покров, вначале следует иссечь достаточно широкий кожный лоскут, чтобы избежать загрязнения внутренних органов.

Для этого, захватив и приподняв (с помощью хирургического пинцета) кожу нижней части стенки живота по средней линии, подрезают ножницами образовавшуюся складку по направлению к голове, срезая кожный лоскут на нужном протяжении. Затем следует сменить ножницы (или очистить их от прилипшей шерсти) и удалить влажным тампоном шерсть, попавшую на образовавшуюся «дорожку». Вскрытие брюшной полости.

Нижнюю часть стенки живота приподнимают пинцетом по средней линии (чтобы не повредить органы), прорезают ножницами вход в брюшную полость, вводят туда одну из браншей (но обязательно тупую) и разрезают стенку кверху до грудины. Затем берут кровоостанавливающие зажимы, захватывают ими внутренние слои стенки живота вместе с брюшиной и отворачивают кнаружи, раскрывая брюшную полость.

Вскрытие грудной полости. Вскрытие производят двумя разрезами через реберные хрящи по обе стороны от грудины снизу вверх. Образовавшийся костнохрящевой лоскут удаляют.

У мелких лабораторных животных следует вскрыть одномоментно брюшную и грудную полости для обеспечения достаточно свободного доступа к внутренним органам, у крупных же вскрывать только ту полость, откуда необходимо брать органы для исследования.

Источник: https://lmed.in/info/arhivy/osnovy-gistologii-30.html

Ваш лекарь
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: