Иммунофлюоресцентное исследование

Анализ на коронавирус методом ИФА

Иммунофлюоресцентное исследование

С 27 марта 2020 каждый желающий может протестироваться на COVID-19 в ПрофМедЛаб. Вы можете вызвать нашего специалиста для проведения анализа на дом, а также заключить с клиникой договор на проведение тестирования у сотрудников от имени юридического лица.
В Профмедлаб выполнено уже более 8000 анализов на коронавирусную инфекцию.

В связи с активным распространением коронавирусной инфекции COVID-19, отдельное внимание уделяется не только лечению, но и своевременному выявлению данного заболевания.

В настоящее время большинство медицинских учреждений применяют метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Он направлен на выявление вирусной РНК в эпителии верхних дыхательных путей.

То есть, если человек уже переболел коронавирусной инфекцией, то результат ПЦР окажется отрицательным.

Относительно недавно диагностика COVID-19 стала проводиться с применением иммуноферментного анализа. В отличие от ПЦР, он позволяет выявить специфические антитела в крови. Отсюда вытекает одно важное преимущество метода. С его помощью можно выявить не только активные формы болезни, но и определить, переболел человек коронавирусом или нет.

Что такое иммуноглобулины и как они связаны с COVID-19

Иммуноглобулины (Ig) — это специфические белки, которые выделяются клетками иммунной системы в ответ на присутствие патогенов. Основными функциями иммуноглобулинов являются:

  • Связывание с антигенами возбудителя.
  • Нейтрализация возбудителя.
  • Привлечение других «компонентов» иммунной системы для подавления чужеродных агентов.

Выделяют несколько классов иммуноглобулинов, но если говорить о коронавирусной инфекции (и других заболеваниях), то наиболее интересными являются два из них — IgG и IgM.

Иммуноглобулины класса М первыми вырабатываются в ответ на проникновение в организм того или иного возбудителя. Поэтому определение данных антител играет важное значение в диагностике острой стадии заболевания, когда патоген присутствует в организме.

Иммуноглобулины класса G обеспечивают дальнейшую защиту от повторного проникновения возбудителя. Их максимальная концентрация отмечается примерно через три недели после заражения COVID-19.

Таким образом, IgM говорят о наличии острой инфекции, а IgG помогают подтвердить тот факт, что человек уже переболел.

Особенности иммуноферментного анализа

Метод ИФА отличается простотой, высокой скоростью анализа (особенно актуально для экспресс-тестов) и позволяет получить дополнительную информацию (человек переболел или еще болеет).

Кроме того, исследование может быть качественным и количественным.

В первом случае определяет сам факт присутствия специфических иммуноглобулинов, а во втором определяется их концентрация, что позволяет косвенно судить о течении заболевания.

Вместе с тем у метода есть и определенные недостатки. Одним из них является относительно низкая чувствительность и специфичность. То есть ИФА может давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Кроме того, иммуноферментный анализ будет неинформативным, если его проводить в первые несколько дней после заражения, так как уровень иммуноглобулинов повышается в течение 3–5 дней.

Наконец, ИФА позволяет определить реакцию иммунной системы на присутствие в организме конкретного возбудителя, однако сам патоген выявить данным методом не получится.

Именно поэтому в некоторых случаях целесообразно сочетать ИФА и ПЦР для получения достоверных и максимально полных данных об особенностях течения коронавирусной инфекции.

Стоимость исследования

Клиника «ПрофМедлаб» предлагает несколько видов тестов на антитела к COVID-19:

  • Количественное определение иммуноглобулинов класса G. Анализ позволяет понять, переболел ли человек коронавирусной инфекцией или нет. Стоимость исследования — 3200 рублей. Материал для исследования — венозная кровь. Сроки — 24 часа.
  • Количественное определение иммуноглобулинов класса G и М. Мы рекомендуем сочетать его с ПЦР с целью получения максимально объективной информации. Стоимость исследования — 3900 рублей. Материал для исследования — венозная кровь. Сроки — 2–3 дня.
  • Экспресс тест SARS-CoV-2 Antibody Test. Можно провести самостоятельно в домашних условиях или у нас в клинике, после чего проконсультироваться с врачом. Стоимость экспресс-теста — 2900 рублей. Материал для исследования — капиллярная кровь (из пальца). Результат будет готов через 20 минут.

Срок готовности исследования — от 1 дня с момента забора материала. Цены на эти и другие виды анализов представлены в таблице:

Наименование услугиЦена исследования*, руб.
Количественный анализ на антитела IgG к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 с применением ИФА (анализ крови), в клинике3200
Определение антител IgM и IgG к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 с применением ИФА (анализ крови), в клинике3900
Экспресс-тест SARS-CoV-2 Antibody Test (кровь), результат через 20 минут2900
ПЦР-анализ к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 (мазок), в клинике2400
ПЦР-анализ к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 (мазок) + выезд на дом ЦАО3500
ПЦР-анализ к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 (мазок) + выезд на дом в пределах МКАД5500
ПЦР-анализ к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 (мазок) + выезд до 35 км от МКАД7000
Определение антител IgG к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 с применением ИФА (анализ крови) – выезд до 10 человек3900
Определение антител IgG к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 с применением ИФА (анализ крови) – выезд 10-30 человек3500
Определение антител IgG к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 с применением ИФА (анализ крови) – выезд 30-75 человек3200
Определение антител IgG к коронавирусной инфекции SARS-Co-V-2 с применением ИФА (анализ крови) – выезд 75-150 человек3000
*на анализы SARS-Co-V-2 для физических лиц скидки и акции не распространяются

Как заказать анализ?

Для сдачи анализ, пожалуйста, заполните форму ниже.

Важно:

  • Исследование на COVID-19 нельзя пройти анонимно. Обязательно внесите паспортные данные.
  • Заявку можно оформить только на одного человека. Если анализ желают сдать несколько лиц, проживающих по одному адресу, заявку нужно заполнить на каждого.

Для получения информации звоните по телефону: +7 (495) 308-39-92.

Источник: https://profmedlab.ru/uslugi-polikliniki/analizy/koronavirus-ifa/

Реакция иммунофлуоресценции: техника проведения, результаты, цена

Иммунофлюоресцентное исследование

Открытая еще в 1942 году Кунсом, реакция иммунофлуоресценции не является новым методом исследования. Однако появление гибридомных технологий, которые позволили получить моноклональные антитела, дало «вторую жизнь» этой реакции, поскольку их использование позволило в несколько раз увеличить чувствительность данной реакции и ее специфичность.

И сегодня мы расскажем вам в подробностях про реакцию прямой и непрямой иммунофлуоресценции (РИФ) как метод диагностики Кунса для взрослых мужчин и женщин при беременности.

Что такое реакция иммунофлуоресценции

Представляя собой отличную возможность для быстрого получения точного диагноза, реакция иммунофлуоресценции позволяет определить наличие возбудителя заболевания в патологическом материале. Для этого применяется мазок из материала, который специальным образом обрабатывается с помощью меченого ФИТЦ (флюоресцеина изотиоцианатом), и изучается в качестве гетерогенного анализа.

Для получения результата применяется люминесцентного микроскопа, в его оптической системе находится набор светофильтров для обеспечения препарата сине-фиолетовым либо ультрафиолетовым светом, имеющий заданную длину волны. Данное условие позволяет флюорохром отсвечивать при заданном диапазоне. Исследователем оцениваются свойства свечения, его характер, размеры объектов и их взаиморасположение.

Кому ее назначают

Проведение реакции иммунофлуоресценции может назначаться при диагностике множества вирусных заболеваний. В частности, ее назначают при комплексном обследовании на выявление следующих факторов:

  • наличие в организме вируса папилломы;
  • заражение сальмонеллой;
  • существование в организме определенных антигенов;
  • выявляется вероятность заражения организма хламидиями, микоплазмами и другими микроорганизмами, имеющими способность к возбуждения вирусных заболеваний человека;
  • диагностика вирусных болезней у животных.

Перечисленные показания позволяют использовать реакцию иммунофлуоресценции при выявлении в организме человека и животных вирусных заболевания различной природы.

Цели проведения

Поскольку данный метод диагностики имеет множество преимуществ, к которым следует отнести его высокую результативность, быстроту проведения и получения результата, а также отсутствие большого количества противопоказаний, с его помощью определяется наличие в организм вирусных инфекций. Поэтому назначать данный анализ могут как для постановки, так и для уточнения диагноза, на основании которого назначается схема лечения.

Проведение процедуры не вызывает неприятных ощущений, для нее необходимо получить материал для анализа, который берется из любой жидкости организма: слюны, мокроты, соскоб с поверхности слизистых оболочек.

Также может для проведения анализа браться кровь. Частоту проведения реакции иммунофлуорсценции назначает лечащий врач, которому необходимо получить данные по динамике протекающих в организме процессов.

Поскольку вреда как для организма, так и для общего самочувствия человека данный анализ не несет, назначаться он может по необходимости.

Сегодня применяется несколько разновидностей данного анализа, каждый из которых имеет ряд специфических особенностей и позволяет получить максимально развернутую картину процессов, происходящих в организме.

К разновидностям реакции иммунофлуоресценции следует отнести:

  1. иммуноферментный анализ — один из наиболее бурно развивающихся видов диагностики, этот анализ дает возможность получения количественных данных без применения серийных разведений. Благодаря использованию полученных измерений оптической плотности жидкости получается точно определить уровень концентрации нужного компонента. Широкие возможности данного вида анализа используются при использовании для его осуществления моноклональных антител, что позволяет определить фазу инфекционного процесса, его остроту;
  2. ДНК-диагностика — данный метод основан на комплементарном связывании нуклеотидов, для чего могут использоваться такие жидкости, как слюна, кровь, ликвор, моча, мокрота, биоптаты, кровь. Данный метод наиболее эффективно позволяет выявить наличие в организме вирусов папилломы, однако многие современные тест-системы могут изредка давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Причиной их может быть загрязнения проб жидкости для проведения анализа специфической ДНК, наличие которой может иметь гнездный или тотальный характер;
  3. иммунохромотография — специфика этого способа определения наличия в организме патологической среды и вирусов состоит в применении в ходе реакции меченых антител. Используется данный метод диагностики для выявления и степени активности процесса заражения стрептококками группы А, а также хламидиями следующих видов: ClamikitR Innotech International, ClearviewTM Chlamydia фирмы Oxoid. Обладая максимально высокой чувствительностью, тест-системы, которые основаны на данной методике исследования. применяются обычно как ориентировочный тест.

Перечисленные разновидности имеют особенности проведения и специфические характеристики результатов, однако все они направлены на получение данных о наличии в организме патологических микроорганизмов и вирусов, а также о степени их размножения и активности.

Показания к проведению

Реакция иммунофлуоресценции может назначаться для выявления в организме любого вида патологической среды.

Хламидии, трихомонады, гонококки и стрептококки, а также лямблии всех видов определяются при проведении данного вида диагностики. Буллезный дерматит и дерматит Дюринга, герпес на губе и другие болезни также требуют проведения РИФ. Назначение врача для ее осуществления обязательно.

Противопоказания для проведения

Поскольку для проведения данной реакции в качестве исследуемого материала требуется любой вид жидкости организма, взятие их обычно не составляет трудностей и противопоказаний для осуществления реакции иммунофлуоресценции не существует. Однако при беременности и у детей до 6 месяцев взятие материала для исследования проводится с максимальными предосторожностями.

Отсутствие противопоказаний позволяет осуществлять проведение данного вида диагностики при назначении врача всем пациентам. Безопасность ее гарантируется использованием дезинфицированным инструментом и одноразовыми шприцами.

Подготовка к процедуре

Особенностей взятия материала для проведения данного анализа не существует. Кровь для него берется натощак, чтобы не было повышенного содержания в ней веществ, которые может изменить истинные показания и дать ложную картину.

Как проходит забор анализов

Поскольку особой подготовки для проведения анализа не требуется, исключается только прием пищи за 12 часов до ее проведения и отсутствие применения лекарственных препаратов, выполняется взятие исследуемого материала как обычный процесс взятия жидкости организма на анализ.

Субъективные ощущения во время процедуры могут различаться в зависимости от чувствительности.

Расшифровка результатов

Применение современных тест-систем позволяет получать максимально точные результаты анализа. Для расшифровки результата применяются следующие данные:

  • степень интенсивности флюоресценции;
  • оттенок флюоресценции;
  • периферический характер процесса свечения объекта;
  • характеристики морфологии, расположения возбудителя во взятом мазке исследуемого материала и его размеры.

Во время исследования объектов, имеющих крупные размеры (например, гарденереллы, трихомонады, клетки, которые уже поражены вирусами), перечисленные выше критерии дают возможность получения максимально достоверных результатов. Однако элементарные тела микоплазмы и хламидий обладают размерами, лежащими на пределе разрешающих способностей люминесцентного микроскопа, что затруд

няет получение точного результата, поскольку периферическое свечение теряет часть своей интенсивности. Оставшиеся критерии уже недостаточны для точной идентификации исследуемых микроорганизмов. По этой причине особые требования предъявляются к специалистам, которые проводят данный вид исследования: уровень их квалификации должен быть достаточным для оперирования имеющимися данными.

По этой причине расшифровкой полученного анализа может заниматься только врач с соответствующим уровнем квалификации. Про цену на исследование методом РИФ читайте ниже.

Средняя стоимость

Цена проведения реакции иммунофлуоресценции зависит от места ее проведения и уровня медицинского учреждения,а также квалификации проводящего анализ специалиста. Сегодня стоимость колеблется от 1280 до 2 160 рублей.

Более подробно о иммунологических реакциях поведает видео ниже:

Источник: http://gidmed.com/dermatologiya/diagnostika-derm/reaktsiia-immunofluorestsentsii.html

Иммунофлюоресцентный анализ крови

Иммунофлюоресцентное исследование

Иммунофлуоресцентный анализ (МФА — метод флуоресцирующих антител, иммунофлуоресценция) (англ.

Immunofluorescence ) — набор иммунологических методов для качественного и количественного определения поверхностных и внутриклеточных антигенов в образцах клеточных суспензий (культур клеток, бактерий, микоплазм, риккетсий, вирусов), образцов крови, костного мозга, альвеолярных смывов, тонких тканевых срезов.

Метод позволяет детально анализировать биологические образцы на присутствие определенных антигенных детерминант, характерных для определенных возбудителей или заболеваний, проводить количественную оценку как поверхностных так и внутриклеточных белков и рецепторов.

Исследование и оценка может выполняться вручную при помощи флюоресцентного микроскопа или автоматизировано с использованием проточного цитометра (flow cytometer) или микрочипового цитометра (сhip cytometer).

Возможно применение конфокального микроскопа и роботизированного флюоресцентного микроскопа (в том числе совмещенных с проточным цитометром) в сочетании с программной системой обработки изображений.

Имеющиеся в настоящее время автоматизированные технологии позволяют анализировать в одном образце примерно 50 различных антигенов с использованием набора различных флюоресцентных маркеров в формате высокоинформативной микроскопии и цитометрии (методы носят названия high-content imaging, high-content cytometry, high-content screening) и примерно вдвое меньшем максимальным набором антигенов с использованием современной проточной цитометрии или конфокальной микроскопии. Основными практическими приложениями являются онкология, микробиология, клеточная биология, генетика, фармакология и др.

Сущность и классификация метода [ править | править код ]

Сущность метода заключается в визуализации антигена специфическими антителами с флуоресцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году А.

Кунсом (англ.) русск. . [1] В настоящее время метод использует как антитела к различным антигенам, так и специфические красители к ДНК (к примеру DAPI), РНК (к примеру Sybr Green II), липидам и белкам.

В базовой МФА методике различают прямой метод, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом, [2] и непрямой, разработанный А. Кунсом и Уиллером в первоначальном варианте непрямого МФА с комплементом.

При прямом методе (пМФА) на исследуемый препарат или в суспензию клеток наносят раствор прямо меченых флюоресцентным красителем антител. Образование комплекса антиген-антитело обнаруживается флюоресцентным сигналом в виде свечения разной степени интенсивности и четкости.

При непрямом методе (нМФА) на препарат наносят антитела против искомых антигенов (т. н. «первые» антитела), а затем видоспецифичные «вторые» антитела против «первых» антител, что позволяет избежать неспецифических реакций. При этом только вторые антитела коньюгированны с флюоресцентным красителем.

К примеру, если при исследовании в качестве «первых» антител используются мышиные антитела — mouse IgG, то в качестве «вторых» используются антивидовые anti-mouse IgG коньюгированные с флюоресцентным красителем.

Комплекс антиген-антитело дает флюоресцентное окрашивание только после связывания со «вторым» антителом.

Непрямые методы требуют наличия только антиглобулиновых видовых сывороток с флюорохромами, но при этом необходимо большое количество тестовых контролей. При постановке прямым методом делается только один контроль, хотя в более ранних версиях метода требовалось множество моноспецифических сывороток.

Долгое время недостатками прямых видов МФА являлись ограниченная чувствительность из-за наличия возможных перекрестных реакций между близкими по антигенному составу объектами и неспецифическая флуоресценция вследствие адсорбции флуоресцирующих глобулинов на различных элементах препарата.

В настоящее время используются коммерческие стандартные конъюгаты, содержащие иммуноглобулины к исследуемым антигенам.

Использование биоинженерных иммуноглобулинов и высокая степень очистки антител позволили практически свести на нет неспецифические реакции, что сделало возможным дальнейшее технологическое развитие метода.

Поскольку прямой метод в настоящее время позволяет избежать неспецифических реакций, автоматизированные методики преимущественно используют прямой метод иммунофлуоресценции.

Результаты ручной микроскопической оценки описываются в так называемых «крестах» (от одного + до четырёх ++++) — субъективная градация степени выраженности реакции глазом исследователя.

В автоматизированных методах в качестве детектора используются фотоумножители или высокочувствительные флуоресцентные фотокамеры, что позволяет регистрировать сигнал с большой точностью и дает значение относительного уровня флюоресценции (relative fluorescence ratio) в широком диапазоне шкалы.

Абсолютное значение высчитывается с помощью контролей или антигенов с известным постоянным содержанием в образце. При использовании автоматизированных методов обработка данных осуществляется специализированными программами для обработки изображений и анализа цитометрических данных.

Значение и перспективы метода [ править | править код ]

Метод имеет решающее значение в ранней диагностике и лечении онкологических заболеваний (иммуногистохимия, онкогематология), диагностике инфекционных заболеваний (например определение CD4+ клеток при ВИЧ) и наследственных синдромов.

Интенсивно развиваются автоматизированные методы, среди которых направления высокоинформативной микроскопии (high content imaging) и высокоинформативной цитометрии(high content cytometry),параллельно развивающиеся с 90х годов комбинированные методики цитометрии-микроскопии (цитометр-микроскоп), а также методы микрочиповой цитометрии с плазмонной голографией [3] в которых отдельные антитела метятся наночастицами.

Высокоточные методы анализа — неотъемлемая часть современной медицины и, в частности, диагностики. Доступные в наше время методы диагностики дают возможность своевременно выявить не только сам факт наличия, но и количество паразитов в организме пациента.

Сейчас, как правило, пациентам предлагается пройти всего один тест — иммуноферментный анализ.

Применение анализа крови ИФА

Иммуноферментный анализ — узкоспециализированный вид анализа, который проводится в условиях лаборатории. Анализ основан на реакции организма, обычно называемой «антиген-антитело».

Метод анализа, основанный на данном показателе, даёт точность в 99%. Это самый точный из известных сейчас методов. В практике почти не было случаев, когда такой анализ выдавал ложные результаты.

Источник: https://o-kak.ru/immunofljuorescentnyj-analiz-krovi/

Ваш лекарь
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: