Ифт периферической крови

Онкологическая диагностика. Выявление клональности лимфоцитов

Ифт периферической крови

В настоящее время этот тест широко используется для диагностики лимфопролиферативных заболеваний.

Лимфопролиферативные заболевания собак и кошек могут проявляться огромным количеством разнообразных клинических признаков, отражая различную природу клеток, дающих начало этим состояниям.

Часто диагноз очевиден, и его можно поставить при цитологическом или гистологическом исследовании ткани, костного мозга или мазка крови.

Однако на ранних стадиях лимфомы, когда злокачественные клетки составляют меньшую часть от общей популяции, а также в случаях, когда присутствуют мелкие, выглядящие доброкачественными, лимфоциты, могут потребоваться дополнительные диагностические исследования, чтобы установить окончательный диагноз.

Выявление клональности лимфоцитов (PARR)

Любой диагностический тест, который может показать, что группа клеток происходит от одной клетки, можно рассматривать как тест на клональность.

Обычно этот термин используют при обнаружении уникальных генов рецепторов В- или Т-клеток: генов иммуноглобулинов В-клеток и генов Т-клеточного рецептора в Т-клетках.

Фрагмент этих генов, кодирующий антиген-связывающий участок, является фрагментом, различающимся по размеру и последовательности у разных лимфоцитов.

По мере созревания и деления B- или T-клеток в ответ на контакт и стимуляцию антигеном, гены иммуноглобулинов и Т-клеточного рецептора передаются дочерним клеткам.

В ходе нормального иммунного ответа разные В- и Т-клетки активируются в ответ на контакт с патогеном, каждая из них претерпевает клональную экспансию и затем погибает, оставляя после себя небольшое количество клеток памяти.

Неопластической может стать одна единственная клетка, но поскольку ее рост и деление больше не контролируются, она может бесконечно размножаться, не требуя никаких сигналов, в отличии от клеток, размножающихся в процессе иммунного ответа.

Следовательно, если будет установлено, что большая часть клеток среди популяции лимфоцитов обладает одинаковым иммуноглобулиновым или Т-клеточным рецептором, можно заключить, что эти клетки, скорее всего, являются потомками одной единственной клетки, и они также являются злокачественными, а не реактивными. Ряд лабораторий в настоящее время использует этот тест в разных клинических ситуациях.

На практике тест на клональность чаще всего используется для различия реактивных (поликлональных) лимфоцитов от неопластических (моноклональных), если это различие сложно установить другим способом.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ТЕСТ РЕКОМЕНДОВАН

  • для заводчиков породы
  • для будущих владельцев породы
  • для ветеринарных специалистов

Говорит ли выявление клональной популяции о наличии лимфомы или лейкемии?

Поскольку тест на клональность может выявить 1 неопластическую клетку на 100 клеток, он дает возможность обнаружить неопластические лимфоциты раньше, чем цитологическое или гистологическое исследование.

Поэтому для определения специфичности положительного (клонального) результата пациенты с положительным результатом, но без гистопатологических или цитологических свидетельств лимфомы должны наблюдаться в течение некоторого периода времени, чтобы понять, действительно ли наличие клональной популяции предсказывает о развитии лимфомы/лейкемии.

В лаборатории Университета Штата Колорадо были получены данные наблюдения за 141 собакой с положительными результатами теста на клональность, но без окончательного цитологического или гистологического диагноза, в течение года.

У 6% этих пациентов так и не появилось дополнительных свидетельств развития лимфомы в течение этого года, у оставшихся 94% пациентов в течение года был поставлен диагноз лимфома или лейкемия.

Единственным не неопластическим заболеванием у собак, при котором может появляться клональная экспансия лимфоцитов, является заражение Ehrlichia, и у 2 собак из 6% пациентов с ложноположительными результатами серологически была подтверждена инфекция Ehrlichia.

В остальных случаях у собак была выявлена ассоциация В-клеточной моноклональной экспании с болезнью Лайма, бартонеллезом и пятнистой лихорадкой Скалистых Гор (но не было получено окончательного доказательства, что именно эти заболевания вызвали клональную экспансию), а оставшиеся случаи были идиопатическими. Эти факты обязательно следует учитывать при назначении теста на клональность и интерпретации результатов этого теста.

Чувствительность данного теста на настоящий момент составляет около 85% в подтвержденных случаях лимфомы или лейкемии.

Ложноотрицательные результаты могут быть получены, поскольку вероятнее всего тест-система не может охватить все разнообразие ДНК генов иммуноглобулинов рецепторов.

Также могут быть получены ложноположительные результаты в случаях инфекции, вызванной Ehrlichia canis, при плохом качестве выделенной ДНК.

Обобщая все выше указанное, можно заключить, что тест на клональность чаще всего используют:

А. Для обнаружения лимфопролиферативного заболевания (лимфомы, хронической лимфоидной лейкемии), если результаты цитологического или гистологического исследования не являются однозначными.

Б. Для ретроспективного поиска пренеопластических экспансий лимфоцитов.

В. Для определения природы лимфоцитов при лимфоме (Т- или В-клетки), что более актуально для собак, поскольку часто происхождение клеток влияет на лечение и прогноз для животного.

Тест на клональность не поможет, если нужно:

А. Провести иммунофенотипирование. Такое исследование проводят с помощью проточной цитометрии или иммуногистохимии.

Б. Определить стадию лимфомы.

В. Различить новообразования лимфоидной и миелоидной клеточных линий.

Это исследование нельзя использовать как скрининговый тест у здоровых животных.

16 июля 2015

© ООО Независимая ветеринарная лаборатория ПОИСК

Источник: https://labpoisk.ru/services/diagnostika-onkologicheskikh-zabolevaniy/vyyavlenie-klonalnosti-limfotsitov/

Хронический лимфолейкоз у взрослых. Клинические рекомендации

Ифт периферической крови

  • Хронический лимфолейкоз
  • Лимфома из малых В-лимфоцитов
  • Ритуксимаб
  • Ибрутиниб
  • Терапия 1-й линии
  • Терапия 2-й линии

ХЛЛ – хронический лимфолейкоз

ЛМЛ – лимфома из малых лимфоцитов

МВЛ – моноклональный В-клеточный лимфоцитоз

ИФТ – иммунофенотипирование методом проточной цитометрии

КТ – компьютерная томография

УЗИ – ультразвуковое исследование

ПЭТ-позитронно-эмиссионная томография

ЭКГ – электрокардиография

Эхо-КГ – эхокардиография

МРТ – магниторезонансная томография

ДВКЛ – В-крупноклеточная лимфома

ЛХ – лимфома Ходжкина

СР – синдром Рихтера

МПИ – Международный прогностический индекс

Термины и определения

Хронический лимфолейкоз – это В-клеточная опухоль из мелких лимфоидных клеток. Хронический лимфолейкоз и лимфома из малых лимфоцитов биологически представляют собой одну опухоль.

Отличие между ними в том, что при хроническом лимфолейкозе в крови имеется значительный лимфоцитоз (>5000 моноклональных В-лимфоцитов), тогда как при лимфоме из малых лимфоцитов (ЛМЛ) клинически манифестного лимфоцитоза нет, несмотря на поражение лимфатических узлов, селезенки, костного мозга.

Международный прогностический индекс (МПИ) для хронического лимфолейкоза основан на пяти параметрах:

  1. наличие del(17p) и/или мутаций TP53,

  2. мутационный статус генов вариабельного региона иммуноглобулинов,

  3. уровень бета-2-микроглобулина,

  4. стадия,

  5. возраст пациентов.

1.1 Определение

Хронический лимфолейкоз – это В-клеточная опухоль из мелких лимфоидных клеток. Хронический лимфолейкоз и лимфома из малых лимфоцитов биологически представляют собой одну опухоль.

Отличие между ними в том, что при хроническом лимфолейкозе в крови имеется значительный лимфоцитоз (>5000 моноклональных В-лимфоцитов), тогда как при лимфоме из малых лимфоцитов (ЛМЛ) клинически манифестного лимфоцитоза нет, несмотря на поражение лимфатических узлов, селезенки, костного мозга.

1.2 Этиология и патогенез

Этиология ХЛЛ неизвестна, обсуждается роль ретровирусов и генеических факторов. Патогенез хронического лимфолейкоза обусловлен пролиферацией клона трансформированных лимфоцитов, что приводит к увеличению лимфатических узлов, других лимфоидных органов, прогрессирующей лимфоидной инфильтрации костного мозга с вытеснением нормального кроветворения.

1.3 Эпидемиология

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) – самый частый вид лейкозов у взрослых. В европейских странах его частота составляет 4:100 000 в год и непосредственно связана с возрастом. У лиц старше 80 лет она составляет >30:100 000 в год.

Медиана возраста на момент установления диагноза в европейских странах – 69 лет. В азиатских странах ХЛЛ встречается значительно реже.

В Российской Федерации ХЛЛ выявляется реже и медиана возраста на момент установления диагноза составляет 62 года, соразмерно меньшей продолжительности жизни россиян.

1.5 Классификация

ХЛЛ может классифицироваться по стадиям (I-III), по характеру лимфаденопатии, по наличию/отсутствию цитогенетических нарушений, аутоимунных осложнений, по группе риска и т.д. Наиболее применима классификация по стадиям по Binet.

1.6 Стадирование, формулирование диагноза

Наиболее применимо стадирование по Binet (табл.1).

Таблица 1. Стадии ХЛЛ по Binet

СтадияХарактеристикаМедиана выживаемости, мес.% больных в дебюте
AHb >100 г/л, тромбоциты >100 ? 109/лПоражено 12060
BHb >100 г/л, тромбоциты >100 ? 109/лПоражено >3 лимфатических областей*6130
CГемоглобин < 100 г/лили уровень тромбоцитов < 100 х 109/л3210

*Лимфатические области:

  • шейные лимфоузлы;
  • подмышечные лимфоузлы (c одной или двух сторон);
  • паховые лимфоузлы (c одной или двух сторон);
  • печень;
  • селезенка.

Международный прогностический индекс

Международный прогностический индекс (МПИ) для хронического лимфолейкоза разработан на основании анализа выживаемости 3472 пациентов, включенных в восемь исследований, проводившихся в Европе и США. Индекс основан на пяти параметрах:

  1. наличие del(17p) и/или мутаций TP53,

  2. мутационный статус генов вариабельного региона иммуноглобулинов,

  3. уровень бета-2-микроглобулина,

  4. стадия,

  5. возраст пациентов.

Каждому из этих показателей присвоен балл, отражающий отношение рисков прогрессии или смерти (таблица 2). МПИ для ХЛЛ позволяет дискриминировать пациентов на четыре группы: низкая (0–1 балл), промежуточная (2–3 балла), высокая (4–6 баллов) и очень высокая (7–10 баллов). Существуют данные, что индекс позволяет стратифицировать пациентов в рецидиве ХЛЛ.

Таблица 2 Международный прогностический индекс

Параметр« –» значениеОРБаллы
TP53 (17p)Делеция/мутация4,24
Статус IgVHБез мутаций2,62
B2M, мг/л>3,52,02
СтадияB/С или Rai I-IV1,61
Возраст>65 лет1,71
Возможные значения шкалы0–10

Формулирование диагноза ХЛЛ складывается из пяти составляющих:

  1. Стадия по классификации Binet (указывается на текущий момент). В диагнозе рекомендуется отметить наличие массивной лимфаденопатии (размеры >5 см, образование конгломератов).

  2. Указание группы риска ХЛЛ по международному прогностическому индексу. Если известен только статус TP53, указывается высокий риск.

  3. Информация о предшествующей терапии.

  4. Фаза: без показаний к терапии, ремиссия, ранний рецидив, поздний рецидив (первый, второй, n-ный), прогрессирование.

  5. Осложнения.

В диагнозе указывается то, что существенно для описания текущей ситуации и принятия решения о терапии.

Примеры формулирования диагноза ХЛЛ:

  • ХЛЛ, стадия А, МПИ 0, без показаний к терапии;
  • ХЛЛ, стадия B, МПИ 4, массивная абдоминальная лимфаденопатия, высокий риск;
  • ХЛЛ, стадия В, МПИ 5, состояние после шести курсов FC, ремиссия;
  • ХЛЛ, стадия А, состояние после терапии хлорамбуцилом, прогрессирование;
  • ХЛЛ, стадия C, МПИ 3, аутоиммунная гемолитическая анемия II степени тяжести;
  • ХЛЛ, стадия С, состояние после пяти курсов FCR, шести курсов R-CHOP, монотерапии алемтузумабом, третий рецидив. Аспергиллез легких.

1.6. Клиническая картина

Клинические признаки определяются стадией заболевания, наличием осложнений и т.д. Поэтому клинические проявления могут отсутствовать на ранней стадии болезни.

По мере развития заболевания появляются В-симптомы – слабость, утомляемость, потливость, снижение веса. Обнаруживается увеличение лимфоузлов (вначале чаще периферических), увеличение селезенки.

При развитии анемии и тромбоцитопении появляются связанные с ними симптомы. Часто отмечается учащение воспалительно-инфекционных заболеваний.

2.1. Жалобы и анамнез

  • Жалобы могут отсутствовать, и тогда признаки заболевания выявляются при случайном обследовании.
  • Может определяться бессимптомное увеличение лимфоузлов любой локализации.
  • Могут присутствовать жалобы на слабость, потливость, потерю веса.
  • Могут присутствовать любые жалобы, связанные с вовлечением органов и тканей.
  • Необходим сбор анамнеза (в т. ч. семейного).

2.2. Физикальное обследование

  • пальпация всех доступных групп периферических лимфатических узлов, печени, селезенки, осмотр миндалин и полости рта.
  • определение наличия В-симптомов.
  • определение статуса по ECOG (0-4)

2.3.  Лабораторная диагностика

Для постановки диагноза «хронический лимфолейкоз» требуются общий анализ крови и иммунофенотипическое исследование с использованием многоцветной проточной цитометрии, которое предпочтительнее выполнять по крови. Диагноз ставят при выявлении более 5000 моноклональных В-лимфоцитов в 1 мкл периферической крови.

Если имеется небольшой лимфоцитоз, но число моноклональных В-лимфоцитов 10% массы тела за 6 месяцев (если пациент не принимал меры к похуданию);

 слабость (ECOG ?2, нетрудоспособность);

 субфебрильная лихорадка без признаков инфекции;

 ночные поты, сохраняющиеся более месяца без признаков инфекции.

  1. Нарастающая анемия и/или тромбоцитопения, обусловленная инфильтрацией костного мозга.

  2. Аутоиммунная анемия и/или тромбоцитопения, резистентные к преднизолону.

  3. Большие размеры селезенки (>6 см ниже реберной дуги), явное увеличение органа.

  4. Массивная и нарастающая лимфаденопатия.

  5. Время удвоения лимфоцитов (ВУЛ) менее 6 месяцев.

Уровень убедительности рекомендаций I (уровень достоверности доказательств А)

Источник: https://medi.ru/klinicheskie-rekomendatsii/khronicheskij-limfolejkoz-u-vzroslykh_14023/

Ифт анализ лимфоцитов периферической крови

Ифт периферической крови

Для проведения исследования необходима венозная кровь

При исследовании определяется принадлежность клеток крови к тому или иному виду. Для проведения анализа требуется использование специального оборудования — цитофлюориметра. Также могут применяться микроскопы, при помощи которых фиксируют люминесцирующие метки и проводят их точный подсчёт. Оборудование должно давать возможность опознать каждую специальную метку в исследуемом материале.

Забор крови производят в вакуумную пробирку.

Кровь в пробирке обязательно перемешивают, медленно переворачивая ёмкость 10 раз. Транспортируют в лабораторию материал при температуре от 18 до 23 градусов, вертикально установив пробирку. Максимальный срок хранения взятого материала сутки. Само исследование занимает менее 5 часов.

Количественный состав каких клеток отражает результат анализа?

Интерес представляют клетки лимфоцитарного ряда

При исследовании интерес представляют несколько видов клеток. В бланке исследования будут зафиксированы полученные данные.

  1. Здоровые полноценные лимфоциты. Фиксируется абсолютное количество лимфоцитов, которые не деформированы, имеют правильное круглое ядро. Патологические изменения в них отсутствуют.
  2. Лимфоциты Т-клеточные. Ядро клеток формируется в вилочковой железе и тимусе. Клетки контролируют работу В-лимфоцитов, образующих ряд антител.
  3. Количество Т-хелперов. Одна из разновидностей T-лимфоцитов. Они обеспечивают правильный иммунный ответ организма при обнаружении чужеродного антигена. Данные клетки первого типа предупреждают развитие раковых клеток, а второго — действуют на агрессивные аллергены.
  4. Лимфоциты Т-цитотоксические. Они отвечают за уничтожение собственных клеток организма, если они поражены. Это свойство помогает противостоять опухолевым процессам, тяжёлыми бактериальными заболеваниями, когда возбудитель паразитирует внутри клетки.
  5. В-лимфоциты. Отвечают за выработку веществ, которые отвечают за правильность работы гуморального иммунитета.
  6. ЕК-клетки. Это естественные киллеры, действие которых избирательное и направленное на клетки с неопластическими изменениями.
  7. ЕКТ. Также природные киллеры, которые уничтожают патологические клетки, замаскированные под Т-лимфоциты.
  8. Иммунорегуляторный индекс. Он отражает соотношение Т-цитотоксических клеток и Т-хелперов.

Показания к исследованию

Исследование назначается при подготовке к трансплантации

Исследование проводится по ряду показаний. В общую программу диспансеризации данный анализ не входит. Показания для проведения исследования следующие:

  • инфекционные патологии, если они затяжные или хронические;
  • сильные аллергии;
  • наличие симптомов иммунодефицита различной природы;
  • подозрения на рост опухолевых новообразований раковой или доброкачественной природы;
  • заболевания аутоиммунного характера;
  • тяжёлые плановые операции;
  • подготовка к пересадке внутренних органов;
  • длительный приём лекарственных препаратов, которые могут повлиять на лимфоциты.

О чем говорят повышенные и пониженные т-лимфоциты

Пониженные Т-лимфоциты могут указывать на «иммунный паралич»

Отклонения показателя от нормы в большую сторону указывает на развитие воспаления иммунной природы.

Чаще всего явление связано с лимфолейкозом, некоторыми вирусными и бактериальными заболеваниями, а также переходом патологии в хроническую форму. Отклонение в меньшую сторону указывает на иммунологический паралич.

Такое явление обычно сопровождает период активного развития раковых опухолей. Также возможно присутствие поражений сердца.

Колебание числа В-лимфоцитов

Повышенный показатель указывает на наличие воспалений в острой или хронической формах. Заболевание может быть вызвано аллергическими, инфекционными или аутоиммунными процессами. При падении уровня компонента крови речь может идти о вирусной инфекции, раковом новообразовании или очаговом воспалении бактериальной природы.

Отклонения показателей естественных киллеров

Изменение показателя выше нормы указывает на тяжёлую, запущенную онкологию, сильные хронические воспаления или чрезмерное синтезирование антигенов против вирусов и бактерий. Понижение показателя возникает из-за высокого уровня Т-лимфоцитов и связано с состояниями, вызывающими его.

Показатели Т-цитотоксических лимфоцитов

Уровень Т-лимфоцитов изменяется при аутоиммунной патологии

Повышение показателя указывает на развитие опухолевого процесса. Также возможно тяжёлое вирусное заболевание в активной форме. Понижение показателя связано с состояниями, развивающимися по причине аутоиммунных нарушений.

Какие процессы определяются по уровню Т-хелперов

Высокие показатели указывают на воспаление в острой форме. Особенно высокие показатели отмечаются при аутоиммунных воспалениях. Снижение показателя связано с вторичным иммунодефицитом и иммунологическим параличом.

Источник: https://moscow-milan.ru/ift-analiz-limfotsitov-perifericheskoy-krovi/

Ваш лекарь
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: